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PCR实验室设计之分区及其配置

更新时间:2022-11-15

  PCR实验室在临床上又称基因扩增实验室。理想的的标准PCR设计组合式实验室包括4个分区,分别是:试剂储存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区,分区及其仪器设备配置参见下图。

  普通的 PCR 仪对标本扩增后,需再经电泳或杂交实验分析,才能判断标本含有哪种细菌、病毒。

  如果使用全自动分析仪如实时荧光定量PCR仪,由于扩增与分析集成在一台仪器内进行,故扩增区与分析区合并为一, PCR 实验室只需设置3个房间。PCR 两种分区及其配置置参见下图 。

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  PCR实验室各区主要功能及相关要求描述:

  试剂储存和准备区(I区);储存试剂的制备、试剂的分装和主反应混合液的制备,可配置电泳溶液。试剂配置在洁净台内操作,一般采用 900mm 的垂直单向流洁净台。冰箱一般为4℃冷藏柜。

  标本制备区(Ⅱ区):主要是核酸(RNA、DNA)的提取和纯化,包括临床标本的保存、核酸储存、核酸加人到扩增反应管、cDNA的合成。核酸提取时需使用苯酚、氯仿等有毒致癌物,高速离心后得到沉淀的 DNA。PCR反应的*大特点是具有较大的扩增能力与极高的灵敏性,但也正是这种特点,使得极其微量的污染即可造成假阳性的检测结果,因此核酸的纯化操作应生物安全柜内进行,为避免提取核酸气溶胶在柜内反复循环,造成标本间交叉污染,出现假阳性结果,*好采用全外排的ⅡB2生物安全柜。标本及 DNA需在一20℃或-80℃的低温冰箱中保存。处理大分子 DNA时使用超声波水浴仪(水浴锅)。房间相对于邻近区域为正压,以避免从邻近区进入的气溶胶污染。

  扩增反应混合物配制和扩增区(Ⅲ区):主要进行的操作为 DNA 或 cDNA 扩增。巢式PCR 测定中,通常在第一轮扩增后必须打开反应管,因此巢式扩增有较高的污染危险性,第二次加样必须在本区洁净台内进行。房间相对于产物分析区应为正压,相对于标本制备区为负压。

  扩增产物分析区(Ⅳ区):对扩增后的产物种类进行分析,判断是哪种细菌、病毒。对于普通的PCR 仪,目前*常用的方法是电泳分析。为防止分析产物污染其他区域,房间应为负压。设备中电热板额定功率1~4kw,发热量较大。



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